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  山东大学耳鼻喉眼学报  2016, Vol. 30 Issue (2): 56-58  DOI: 10.6040/j.issn.1673-3770.0.2016.042
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引用本文 

周小彦, 林鹏, 孙士铭, 张雅娜, 李晓劼, 石玉凯. 鼻窦炎患者血清HMGB1表达及其临床意义[J]. 山东大学耳鼻喉眼学报, 2016, 30(2): 56-58. DOI: 10.6040/j.issn.1673-3770.0.2016.042.
ZHOU Xiaoyan, LIN Peng, SUN Shiming, ZHANG Ya'na, LI Xiaojie, SHI Yukai. Expression and clinical significance of serum HMGB1 in sinusitis patients[J]. Journal of Otolaryngology and Ophthalmology of Shandong University, 2016, 30(2): 56-58. DOI: 10.6040/j.issn.1673-3770.0.2016.042.

作者简介

周小彦。E-mail:1021427419@qq.com

通讯作者

林鹏。E-mail:linpengf@sina.com

文章历史

收稿日期：2016-01-28
网络出版时间：2016-03-30 09:40
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鼻窦炎患者血清HMGB1表达及其临床意义
周小彦1, 4, 林鹏2 , 孙士铭3, 张雅娜2, 李晓劼1, 石玉凯4    
1. 天津医科大学一中心临床学院, 天津 300192;
2. 天津市第一中心医院耳鼻喉科, 天津 300192;
3. 天津医科大学总医院, 天津 300052;
4. 天津市东丽区中医医院, 天津 300182
收稿日期：2016-01-28; 网络出版时间：2016-03-30 09:40
作者简介：周小彦。E-mail:1021427419@qq.com
通讯作者：林鹏。E-mail:linpengf@sina.com
摘要: 目的 检测高迁移率族蛋白B1(HMGBl)在慢性鼻窦炎患者血清中的表达水平并探讨其临床意义。方法 选取32例鼻窦炎患者, 其中Ⅰ型鼻窦炎24例, Ⅱ型、Ⅲ型鼻窦炎8例, 并选取同期正常志愿者8例作为对照组, 志愿者均排除患感染性或肿瘤性等有可能引起血清HMGB1高迁移的疾病。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测所 有研究对象血清中HMGBl水平。结果 ① 鼻窦炎患者血清HMGBl水平高于正常对照组(P < 0.05)；② Ⅰ型与Ⅱ、Ⅲ型鼻窦炎患者血清HMGB1含量水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 慢性鼻窦炎患者的血清HMGBl 水平高于正常人,可以作为鼻窦炎患者的血清检测指标, 同时为将HMGB1作为鼻窦炎患者新的治疗靶点提供依据。
关键词: 鼻窦炎    高迁移率族蛋白类    酶联免疫吸附测定    
Expression and clinical significance of serum HMGB1 in sinusitis patients
ZHOU Xiaoyan1, 4, LIN Peng2 , SUN Shiming3, ZHANG Ya'na2, LI Xiaojie1, SHI Yukai4    
1. The First Center Clinical College of Tianjin Medical University, Tianjin 300192, China;
2. Tianjin First Center Hospital, Tianjin 300192, China;
3. Tianjin Medical University General Hospital, Tianjin 300052, China;
4. Tianjin Dongli Chinese Medical Hospital, Tianjin 300300, China
Abstract: Objective To investigate the expression and clinical significance of serum high mobility group box-1 protein (HMGB1) in chronic sinusitis patients. Methods A total of 32 sinusitis patients were enrolled in this study, of which 24 were type Ⅰ sinusitis, 8 were type Ⅱ sinusitis or type Ⅲ sinusitis. Meanwhile 8 healthy volunteers confirmed without infectious diseases or neoclassic diseases served as the control group. Enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) was applied to test cases’ serum HMGB1 level. Results (1) Sinusitis patients had higher level of serum HMGB1 than the control (P < 0.05). (2) There was no significant difference of serum HMGB1 between type Ⅰ sinusitis patients and type Ⅱ and type Ⅲ sinusitis patients. Conclusion Chronic sinusitis patients have higher level of serum HMGB1 than normal people. Serum HMGB1 may serve as serum detection index for sinusitis patients. In addition, it provides the theoretic foundation for therapeutic target of sinusitis.
Key words: Sinusitis    High mobility group box protein    Enzyme-linked immunosorbent assays    

高迁移率族蛋白 (high mobility group box protein，HMG)是由Goodwin于上世纪60年代最早发现的一类进化高度保守的非组蛋白，它的分子质量很小，在凝胶电泳中泳动速度很快，故名高迁移率蛋白。HMG家族又分为HMGA、HMGB、HMGN三个亚家族，HMGB又分为HMGB1和HMGB2，其中HMGB1因其广泛的生物学效应而最受关注[1]。近年来它作为一种重要的炎症细胞因子而倍受重视，其致炎作用最初是由WANG等于1999年在脓毒症小鼠实验中发现[2]。其后发现多种临床炎症疾病的患者血清或炎症组织中HMGB1的含量均明显高于正常人。在临床各个领域对HMGB1的研究已经相当广泛，其在炎症患者血清或病变组织中的浓度可以反映病情活动性，同时以HMGB1为靶点的新的治疗方法也在研究中。本次实验研究主要针对慢性鼻窦炎患者的血清HMGB1的含量进行检测，如果其在血清中含量升高，将来HMGB1既可以作为慢性鼻窦炎患者的临床监测指标，又可以作为慢性鼻窦炎患者的新治疗靶点。

1 资料与方法 1.1 研究对象

① 鼻窦炎组： 将2014年7月至2014年10月天津第一中心医院耳鼻喉科鼻窦炎患者32例纳入研究，入院第2天清晨完成标本采集。根据我国1997年海口会议鼻窦炎分型标准[3]，分为Ⅰ型鼻窦炎患者24例，Ⅱ型、Ⅲ型鼻窦炎患者共8例。② 正常对照组：选择同期天津第一中心医院8位实习医生作为对照组(排除患感染性疾病及肿瘤性疾病)，均于清晨完成标本采集。标本采集后室温下血液自然凝固20 min，离心20 min(3 000转/min)。仔细收集上清，并保存在-20 ℃冰箱内。

1.2 血清HMGBl浓度水平测定

人高迁移率族蛋白1(HMG-1)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒(由北京冬哥生物科技有限公司进行样本检测)。应用双抗体夹心法测定标本中人高迁移率族蛋白1(HMG-1)水平。用纯化的人高迁移率族蛋白1(HMG-1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入高迁移率族蛋白1(HMG-1),再与HRP标记的HMG-1抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的高迁移率族蛋白1(HMG-1)呈正相关。用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度(OD)值，通过标准曲线计算样品中人高迁移率族蛋白1(HMG-1)浓度。

1.3 统计学处理

采用SPSS 22.0软件，连续型变量在各组若满足正态分布，则使用 ± s进行描述，两组间均值的比较采用独立样本t检验或t′检验。 P < 0.05认为差异有统计学意义。

2 结 果

鼻窦炎患者外周血HMGBl水平(80.752±7.149)μg／L，正常对照组外周血HMGBl水平(64.064±5.987)μg／L，两组差异有统计学意义(t=6.074,P=0.001)。Ⅰ型鼻窦炎患者外周血HMGBl水平为(81.486±7.387)μg／L，Ⅱ型、Ⅲ型鼻窦炎患者外周血HMGBl水平为(77.460±5.423)μg／L，Ⅰ型鼻窦炎患者外周血HMGBl水平与Ⅱ、Ⅲ型鼻窦炎患者外周血的HMGBl水平相比差异无统计学意义(t=1.413,P=0.168)。

3 讨 论

高迁移率组蛋白B1是广泛存在于真核生物细胞核内的进化高度保守、含量丰富的非组蛋白，是一种重要的炎症介质。由3个独特的结构域组成，即A.BOX、B.BOX和C末端区。其中HMGBl的B.BOX是发挥致炎的重要区域，而A.BOX是B.BOX的拮抗位点，能竞争性抑制A.BOX的炎症作用[4]。通过与晚期糖基化终产物受体(RAGE)和Tou样受体家族中的TLR2和TLR4结合调控下游细胞因子表达从而介导炎症反应，参与了感染性疾病、心血管疾病、休克MODS、关节炎、脓毒症甚至是肿瘤的发病过程[5]。慢性鼻窦炎是鼻腔和鼻窦黏膜的慢性炎症性疾病，通常是感染(病毒、细菌、真菌)、变态反应和黏液纤毛传送功能障碍等多种因素共同作用的结果。组织形态特点表现为上皮细胞损伤、炎性细胞浸润和上皮下层水肿。一般病程较长，患者有不同程度的头痛鼻堵流脓涕等症状，经抗生素治疗无效且鼻窦引流不畅，一般考虑经鼻内镜的手术治疗，寻求新的保守治疗方法应为耳鼻喉科临床医生职责所在。本实验已经证实，慢性鼻窦炎患者的血清中HMGB1的含量是高于正常对照组的，这与姚永明等[5]的研究结果一致。但是Ⅰ型鼻窦炎患者与Ⅱ型、Ⅲ型鼻窦炎患者的HMGB1含量无统计学意义，表明鼻窦炎本身分型对其含量无影响。近年来研究发现，新的“晚期炎性因子”高迁移率蛋白(HMGB1)在炎症网络中起到关键作用，它可以直接作用于各种炎性细胞(包括中性粒细胞和嗜酸性粒细胞)诱导其释放多种促炎因子或炎性介质，启动机体的天然和获得性免疫过程。近年来针对HMGB1为靶点的治疗研究也从未中断过。有研究证实，丙酮酸乙酯(EP)可通过抑制单核-巨噬细胞内的信号分子表达，从而抑制LPS(受脂多糖)诱导的单核-巨噬细胞HMGB1的释放，提高了动物的存活率[6]。在急性坏死性胰腺炎肝损伤实验中，应用乌斯他汀可以降低患病小鼠肝组织内的HMGB1的含量，从而降低小鼠急性坏死性胰腺炎的肝损伤率[7]。在基础医学研究中，研究者构建了高迁移率蛋白B1-A盒(HMGBl-Abox)蛋白，并在急性小鼠肝损伤模型中注射该蛋白，结果证实重组HMGBl-Abox蛋白可以显著减少急性肝衰竭时肝组织HMGBl的表达和分泌，从而影响炎症反应进程，对肝衰竭起到了保护作用[8]。但经验证明，单个切入点的治疗往往不能取得令人满意的效果，HMGB1异源单克隆抗体在人体内也将产生不良反应。因此如何准确定位抗HMGB1治疗方案及采用相应的治疗措施，仍然是一个相当困难的问题。本实验结果已经证实，慢性鼻窦炎患者血清中HMGB1的含量高于正常对照组，认为HMGB1可以作为鼻窦炎炎症因素的临床监测指标，将来有可能作为鼻窦炎患者的一个新的治疗靶点。但慢性鼻窦炎患者应用HMGB1拮抗剂或阻断其表达通路而得到治疗的具体药物尚未问世，但是其研究前景大有希望。

参考文献
[1] Lotse M T, Traeey K J.High mobility group box 1 protein (HMGBl):nuclear weapon in the immune arsenal[J]. Nat Rev Immun, 2005, 5(4):331-334.(1)
[2] Wang H, Bloom O, Zhang M, et al.HMG-1 as a late mediator of endotoxin lethality in mice[J]. Science, 1999, 285(5425):248-251.(1)
[3] 中华耳鼻咽喉科杂志编辑委员会, 中华医学会耳鼻喉科分会.慢性鼻窦炎鼻息肉临床分型分期及内窥镜鼻窦手术疗效评定标准(1997, 海口)[J]. 中华耳鼻咽喉科杂志, 1998, 33(3):6-6.(1)
[4] Muller S, Scafidi P, Degryse B, et al.The double life of HMGBIchromatin protein:architectural factor and extracelhlar signal[J]. EMBO, 2001, 20(16):4337-4340.(1)
[5] 姚咏明, 刘辉.对高迁移率族蛋白Bl作用的新认识[J]. 中国危重病急救医学, 2005, 17(7):385-386.(2)
[6] 杨超, 吴传新, 孙航孙, 等.丙酮酸乙酯抑制脓毒症时HMGBl释放的分子机制[J]. 中山大学学报, 2014, 35(2):187-193.(1)
[7] 王静, 王炬, 邓明明, 等.乌司他丁对急性坏死性胰腺炎大鼠肝损伤中高迁移率族蛋白1表达的拮抗作用[J]. 中华消化杂志, 2014, 34(3):191-194.(1)
[8] 刘婷, 贺永文.原核构建高迁移率蛋白B1-A盒蛋白在小鼠急性肝功能衰竭中的保护作用及其机制[J]. 中华肝脏病杂志, 2010, 18(3):223-226. LIU Ting, HE Yongwen.Protective effect of recombinant HMGB1 A box protein in mouse with acute hepatic failure[J]. Chin J Hepatol, 2010, 18(3):223-226.(1)