hEGF、TGFβ2对兔角膜内皮细胞损伤的作用及相关蛋白 p27Kip1和 Cdk4 的表达

山东大学耳鼻喉眼学报

hEGF、TGFβ2对兔角膜内皮细胞损伤的作用及相关蛋白 p27Kip1和 Cdk4 的表达

刘澍1，陈美玲2，张树平3，王振华4

1. 烟台海港医院眼科，山东烟台 264002; 2. 青岛大学附属烟台毓璜顶医院眼科，山东烟台 264000; 3. 滨州医学院药理学教研室，山东滨州 256617; 4. 烟台大学药理学教研室，山东烟台 264000

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2006-02-25 发布日期:2006-02-25

LIU Shu1, CHEN Meiling2, ZHANG Shuping3, WANG Zhenhua4

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2006-02-25 Published:2006-02-25

摘要/Abstract

摘要： 目的：观察人表皮生长因子（hEGF）、转化生长因子β2（TGFβ2）对家兔角膜内皮细胞损伤的作用及相关蛋白 p27Kip1和Cdk4的表达。方法：体外培养家兔角膜内皮细胞传一代融合后，定量损伤直径3.5?mm范围内的细胞，培养液中分别加入不同浓度的hEGF和（或）浓度为10?ng/ml的TGFβ2，对照组不加任何药物。损伤后第1、3、5，7天倒置显微镜下照相并用计算机测量未愈合面积。应用免疫荧光染色法，检测损伤修复不同阶段p27Kip1和Cdk4的含量。结果：一定质量浓度的hEGF可加快体外培养的家兔角膜内皮细胞的损伤愈合并上调Cdk4的表达, 且具有剂量依存性，以10～40?ng/ml为最适宜。外源性TGFβ2抑制角膜内皮细胞损伤修复。hEGF孵育损伤模型24?h后，TGFβ2对此无抑制作用。 TGFβ2作用损伤模型24?h后，可抑制hEGF的促修复作用。结论：一定质量浓度的hEGF能促进体外培养的家兔角膜内皮细胞的损伤修复并上调Cdk4的表达。外源性TGFβ2可抑制家兔角膜内皮细胞的损伤修复并上调p27Kip1的表达。

关键词: 表皮生长因子, 转化生长因子β, 角膜, 内皮细胞, 兔

Abstract: Objective: To investgate the different activity of human epidermal growth factor （hEGF） and transforming growth factor β2 （TGFβ2） on wound healing in rabbit corneal endothelial cells and the expression of p27Kip1 and Cdk4. Methods: Wound was created in confluent secondary cultured rabbit corneal endothelial cells which was added in different doses of hEGF and/or but 10 ng/ml TGFβ2， no hEGF or TGFβ2 was added in the controls. The wound area was evaluated by computer on 1, 3, 5 and 7 days after wounding, moreover the subcellular localization of cyclin dependent kinase 4 (Cdk4 ) and p27Kip1(p27) were determined by immunofluorescent staining. Results: hEGF enhanced the wound healing and Cdk4 in a dosedependent manner and the responses peaked at 10～40 ng/ml. TGFβ2 inhibited the wound healing and upstreamed p27 in the cultured rabbit corneal endothelial cells. hEGF could be used to cure the wound following 24 hours usage, but TGFβ2 could not; whereas at the same time or 24 hours after adding TGFβ2, hEGF had no effect on the wound. Conclusion: hEGF of certain concentration enhances the wound healing in cultured rabbit cornea endothelial cells and upstreams the expression of Cdk4. Exogenous TGFβ2 inhibits the wound healing in cultured rabbit cornea endothelial cells and upstreams the expression of p27.

Key words: Transforming growth factor beta, Cornea, Epidermal growth factor, Endothelial cell, Rabbits

刘澍,陈美玲,张树平,王振华 . hEGF、TGFβ2对兔角膜内皮细胞损伤的作用及相关蛋白 p27Kip1和 Cdk4 的表达[J]. 山东大学耳鼻喉眼学报, 2006, 20(1): 74-78 .

. LIU Shu1, CHEN Meiling2, ZHANG Shuping3, WANG Zhenhua4[J]. JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY (OTOLARYNGOLOGY AND OPHTHALMOLOGY), 2006, 20(1): 74-78 .

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